HPLC-MS/MS法测定万通炎康片中异嗪皮啶、苦玄参苷ⅠA、迷迭香酸的含量文献综述

 2023-01-12 03:01

文献综述:

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万通炎康片的主要成分为苦玄参,肿节风。为纯中药制剂。方中苦玄参清热解毒,消肿止痛,开胃消食,用于感冒风热,咽喉肿痛,痢疾,毒蛇咬伤,跌打损伤,胃痛,消化不良。肿节风抗菌消炎,祛风通络,活血散结,用于肺炎,阑尾炎,蜂窝组织炎,风湿痹痛,跌扑损伤,肿瘤等。临床上,万通炎康片功能主治疏风清热,解毒消肿。用于外感风热所致的咽部红肿,牙龈红肿,疮痣肿痛,急慢性咽炎,扁桃体炎,牙龈炎,疮庤见上述证候者。

万通炎康片中的两种药材中药成分比较复杂,除了含有苦玄参,异嗪皮啶外,还含有迷迭香酸,中国药典2005版第一部只采用薄层色谱法对肿节风和苦玄参鉴别。在含量测定项下,药典中仅用HPLC测定了肿节风的异嗪皮啶的含量外并没有测定迷迭香酸以及苦玄参苷ⅠA的含量。迷迭香酸(Rosmarinic acid,RosA)是一种天然的具有多种生理活性的水溶性酚酸类化合物。1958年,意大利化学家Scarpati和Oriente 首次从Rosmarinus officinalis分离得到,因而得名。为浅黄色粉末,易溶于水及乙醇水溶液,难溶于氯仿,不溶于油脂、无水乙醇,具有很强的抗氧化能力。与三氯化铁-铁氰化钾及溴酚蓝显色均为阳性, 香荚兰醛显粉红色。稳定性较好,适宜在酸性及低温条件下保存、使用,但在使用时应避光,并避免与Ca、Mg离子的接触。侯建春、郭道森等发现迷迭香酸具有很强的热稳定性和耐低温贮藏性。迷迭香酸是一种含多酚羟基的酸,易溶于水及乙醇水溶液,不溶于油脂、无水乙醇。根据它的溶解特性可以选择水或乙醇为溶剂进行提取,还可以用微波法,超声波辅助微波法,酶法辅助提取法,超临界CO2流体萃取法提取。在药理作用方面,迷迭香酸具有极强清除体内自由基的活性和抗氧化作用,还有抗炎活性(德国Nattermann公司于1991年把它作为抗炎、镇痛、解毒药物投放市场。)对肾炎有一定的抑制作用,同时具有抗病毒活性抗血栓作用。苦玄参苷ⅠA是药材苦玄参中一种主要的化学成分,现已有不少文献对苦玄参ⅠA进行测定研究,多采用HPLC法。如世界科学技术杂志的《HPLC法测定苦玄参中苦玄参苷I_A的含量》(陈勇等著);广西植物杂志的《苦玄参药材中苦玄参苷ⅠA和ⅠB的含量分析》(方宏; 梁小燕; 宁德生; 陈海珊等著);广西植物杂志的《桂南地区苦玄参药材RP-HPLC指纹图谱研究》》(方宏; 梁小燕; 宁德生; 陈海珊等著);时珍国医国药杂志的《苦玄参化学成分和定量分析研究进展》(岑菲菲; 甄汉深; 宋志华等著)等,不少文章对苦玄参的成分及检测方法都有研究,但液质联用法几乎没有。

随着联用技术的日趋完善,HPLC-MS逐渐成为最热门的分析手段之一。特别是在分子水平上可以进行蛋白质、多肽、核酸的分子量确认,氨基酸和碱基对的序列测定及翻译后的修饰工作等,这在HPLC-MS联用之前都是难以实现的。传统的HPLC-UV分析方法,柱子使用一段时间后柱效下降和所有峰的加宽是经常碰到的事,其主要原因是柱受到污染和柱的固定相流失,流动相含杂质在图谱上出峰对分离度有影响有时难以分辨杂质峰于测定物质的出峰。使用HPLC-MS/MS不需要进行衍生化,样品要么在溶液中进行电离(可使用电喷雾电离)要么具有挥发性,可使用大气压化学电离,在单个分析中实现确定/定量。质谱仪由离子源,质量分析器,离子检测器,真空系统和数据处理系统等部分组成,质谱的形成过程为离子化,质量分离和离子检测。样品通过导入系统进入离子源,被电离成离子和碎片离子,由质量分析器分离并按核质比大小依次抵达检测器,信号经放大、记录得到质谱图。四级杆质量分析器又称四级滤质器,为了使用四级杆进行多级质量分析,需要按顺序摆放三个四级杆。每个四级杆有独立的功能:第一个四级杆(Q1)用于扫描目前核质比的范围,选择需要的离子。第二个四级杆(Q2)也称碰撞池,它集中和传输离子,并在所选择的的离子飞行路径中引入碰撞气体(氦气或氮气)。第三个四级杆(Q3)用于分析在碰撞池(Q2)碎片离子.HPLC-MS作为已经比较成熟的技术,目前己在生化分析、天然产物分析、药物和保健食品分析以及环境污染物分析等许多领域得到了广泛的应用。利用HPLC-MS分析混合样品,和其他方法相比具有高效快速,灵敏度高,只需品进行简单预处理,尤其适用于含量少、不易分离得到或在分离过程中易的组分。

因此HPLC-MS技术为天然产物研究提供了一个高效、切实可行的分析途国内利用该技术在天然产物研究中已经有很多报道。液质联用法测定万通炎康片中三种化学成分的含量测定方法值得进一步研究探索。

1.仪器与药品

Agilent 1200LC,安捷伦6410LC/MS QQQ。

万通炎康片的处方为苦玄参,肿节风。以上二味,加水煎煮二次,每次2小时,合并煎滤液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.10~1.15清膏,放冷,加入3倍量乙醇,搅匀,静置24小时,取上清液回收乙醇,浓缩至相对密度为1.10~1.20(70℃)的清膏,加入辅料适量,制成颗粒,干燥,压制成1000片(大片)或1500片(小片),包薄膜衣;或压制成3000片,包糖衣,即得。

2. 色谱条件的建立

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