一、课题解决的问题
纤维化通常以细胞外基质(ECM)蛋白在数量上和组成上发生宽泛的重构为特征。肝脏、胰腺、肾脏以及肺纤维化的长期作用能够使组织代谢紊乱并影响器官的正常功能。有研究发现新生成的脂肪细胞外基质成分以及其结构重塑导致了组织中纤维的异常积累,这一现象在哨齿类动物中有所报道,人类中也有同样的证据。然而这些纤维沉积起源的原因及可能的发生机理尚不清楚。
有研究发现,纤维化的发生起始于组织的损伤修复。组织修复损伤机制的生物学基础是新生组织细胞替换死亡或者炎症损伤的细胞。这一修复过程始于损伤细胞被相同类型细胞替换,如果损伤继续,损伤细胞逐步被纤维细胞及其分泌的纤维的累积所替代,最终纤维组织将替代正常的组织。虽然最初的修复步骤有利于组织结构及功能的恢复,但是这一纤维化进程的过度发展可能会导致病理性结果并最终导致器官的衰竭死亡。
本课题主要研究在缺氧条件下，二甲双胍、白藜芦醇是如何抑制炎症反应及脂肪组织纤维化的。HIF-1alpha;受缺氧调控，缺氧时，HIF-1alpha;蛋白表达增加，作为一个转录因子，能够催化下游一系列信号表达，LOX即为下游的直接靶点，当LOX 过度表达时，会引起ECM的过度交联，进而引发不可逆的具有渐进性的纤维化病变，通过QPCR检测细胞外基质的成分，Col3alpha;、Col6alpha;、elastin等的表达会上调。肥胖时，肥大的脂肪细胞会分泌一些趋化因子促使单核/巨噬细胞进入脂肪组织。当脂肪细胞肥大到一定程度，脂肪细胞紧紧的束缚在细胞外基质内，会逐渐丧失它的功能，它们就会出现死亡，进而巨噬细胞会以特有的冠状结构聚集在其周围并吞噬它们，最终引起慢性炎症，缺氧时IL-6、TNF-alpha;等炎性因子的表达会升高。本文旨在研究二甲双胍、白藜芦醇干预缺氧诱导脂肪组织纤维化的作用路径。
- 研究方法和技术路线
2.1药物配制：
二甲双胍（Met），称取0.01657g，1mLPBS溶解，用于实验时稀释100倍即可。
白藜芦醇（Res），称取0.0228g，溶解于1mLDMSO中，配成母液，去母液10mu;L，用990mu;L的PBS稀释，用作实验时稀释100倍即可。
2.2小鼠附睾脂肪组织的制备及缺氧处理
正常小鼠脱颈椎处死后，浸于75%乙醇中消毒3分钟，放入超净工作台中。迅速取出附睾周围的脂肪组织，剔除周围血管及其他结缔组织。组织剪碎至毫米状，放有无血清培养基的六孔板中，每2mL培养基大约150mg脂肪组织，将组织分为空白组，模型组，二甲双胍（Met）组和白藜芦醇（Res）组，于37°C, 5% CO2, 21%O2培养箱中静置培养0.5h。分别放到正常培养箱和缺氧培养箱，37°C, 5% CO2, 1%O2, 94%N2中培养24小时后进行Western Blot或QPCR。
2.3 Western blot 分析：
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
