开题报告1.1 研究背景PIM1属于原癌基因，PIM1蛋白具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性，参与细胞的存活和细胞增殖，从而在肿瘤选择性的发生与发展过程中的具有重要的作用。
PIM1发挥其致癌活性的路径包括MYC基因转录活性的调节，调节细胞周期进程，通过磷酸化和抑制凋亡蛋白（BAD，MAP3K5，FOXO3）。
MYC基因的磷酸化导致MYC蛋白的稳定性提高，从而增加转录活性。
通过稳定MYC从而发挥PIM1的致癌作用可能部分地解释了这两种癌基因在肿瘤发生之间具有协同作用。
本实验设计带有多聚组氨酸（his）亲和标记的PIM1蛋白重组质粒，运用IPTG诱导，镍柱纯化以及聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法，构建一整套PIM蛋白的表达纯化体系。
获得的PIM1蛋白达到必要的纯度后，可用于与已筛选出的候选中药小分子IPS001相互作用，测量二者结合的结构域及理化参数，为有关疾病的治疗提供新的作用靶点和治疗药物。
1.2 本课题的研究内容 1.2.1 构建His-PIM1-pET28a质粒His-PIM1-pET28a质粒图谱如图所示，载体pET28a多克隆位点上方存在6个组氨酸串联而成的His标签，且于单克隆酶切位点EcoRI、HindIII处连接目的基因片段PIM1 (从PIM1全长的第29个氨基酸开始)，无移码现象，可以完整表达目的蛋白。
设计引物，于引物一端加特异酶切位点，即上游加入EcoRI位点，下游加入HindIII位点，扩增PIM1基因片段。
PCR产物及pET28a载体经EcoRI、HindIII双酶切后，回收，连接反应12小时后，转化、挑取单克隆酶切鉴定。
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
