一．研究背景、概况及意义

1．研究背景、概况

1979年世界卫生组织（WHO）提出急性心肌梗死（AMI）诊断标准为有典型的持续性的胸痛史，典型的心电图改变包括ST 段抬高和Q 波的出现，心肌酶学的改变，并认为以上3项中有2项为阳性即可诊断为(AMI )。临床上AMI 的诊断常常依赖于心电图和病史，但单一心电图检查还存在不足。心电图诊断AMI 的阳性率为80%，其余的20%必须依靠生物化学标志物确诊。即使心电图阳性病例，也需检测生物化学标志物以提高诊断可靠性。生物化学标志物也是临床评估病情、治疗监测和预后判断的重要指标。就新近出现的生物标志物超敏肌钙蛋白（hs-cTnI）、骨保护素（OPG）、核因子-kappa;B受体活化因子配体中，心肌肌钙蛋白（ｃＴｎ）是目前临床敏感度和特异度最好的心肌损伤标志物，肌钙蛋白升高即可确诊为（AMI）。但用以往方法检测肌钙蛋白却相对地灵敏度较低。这主要是由于肌钙蛋白测定试剂盒敏感度不够的限制。超敏肌钙蛋白试剂盒的诞生使得肌钙蛋白的检测灵敏度大大提高。急性心肌梗死的初期，能尽早发现并给予及时处理，可以挽救更多的濒死心肌，其预后可得到改善

2．研究意义

血清hs-cTnI是一种反映心肌损伤的一个敏感可靠且实用的生化指标，ｃＴｎＩ被认为是目前临床最敏感性和特异性最好的心肌损伤标志物，可以作为心肌梗死疾病的独立性诊断指标，检测hs-cTnI，以此值为导向为临床及时用药和合理处理提供可靠的临床依据，使得ＡＭＩ患者能尽早地作出诊断并得到及时正确治疗，这对于降低降低ＡＭＩ患者的致残率和死亡率是非常重要的。

已有报道指出，在诊断AMI、心挫伤、不稳定型狭心症患者的心肌特异性障碍性疾病时，检测cTnI浓度是非常有效。发生急性心肌梗塞时，在4-8小时以内cTnI由于心肌受到障碍被释放到血液中，因此其浓度脱离健康人的浓度范围。通常，AMI发病后12-18小时后，cTnI浓度达到最高，并且维持5-10日。对于AMI患者，cTnI浓度在治疗过程中的增减情况与CK-MB是类似的。但是，最近的研究发现在检测心肌障碍、特别是骨骼肌障碍上，cTnI指标比CK-MB更有效。

二．研究主要内容

研究内容：

通过抗原抗体的双抗体夹心法，利用体外诊断试剂和对应的检测仪器，检测血清中超敏肌钙蛋白（hs-cTnI）的含量，并对于试剂检测的准确性进行探究，其中内容如下：

（1）了解双抗体夹心法原理。

（2）根据双抗夹心原理，设计具有科学性的实验诊断方案，检测各种血清，最后进行比对。

（3）对于体外诊断试剂的研究，通过一些质控品和校准品实验，验证试剂的稳定性。

（4）对于试剂可靠性的研究，使得最终检测结果具有说服力，而且可以初步接触关于药品保存的实验方案与操作

（5）掌握体外诊断试剂盒与对应的仪器使用

研究目标：

（1）掌握通用的检测诊断步骤，检测血清中超敏肌钙蛋白（hs-cTnI）的含量。

（2）通过大量对照实验，获得检测含量的范围，推断出疾病诊断的可能性与可靠性。

（3）研究超敏肌钙蛋白（hs-cTnI）检测试剂的保存性有关实验，获得保存性有关数据，从而得出结论，对于医疗实际应用有着指导意义。

（4）通过浓度和发光值表现最终结果。

本课题设计需要有着实际生活的指导意义，对于医疗的生产，保存，诊断多方面都需有所涉及，考虑的方面较多，需进行持续性的实验验证。

三．研究步骤、方法及关键

研究方法:

肌钙蛋白是由肌钙蛋白T、肌钙蛋白C和肌钙蛋白I三种蛋白质组成的复合体。肌钙蛋白的主要作用是抑制横纹肌肌动蛋白和肌球蛋白之间的相互作用。另外，肌钙蛋白是肌动蛋白肌球蛋白ATP酶的抑制物。肌钙蛋白有三种同分异构体形式，肌钙蛋白I仅仅存在于心脏组织，肌钙蛋白I与肌钙蛋白T和肌钙蛋白C的主要区别是N末端有抗原性区别的31氨基酸残基序列。应用抗cTnI单克隆抗体可以实现cTnI的特异性检测，所以cTnI已经作为急性心肌梗塞的标准诊断方法，特别是当心电图检测无异常时，可以用cTnI指标作为诊断手段。

该项目使用的是双抗体夹心法，两株cTnI单克隆抗体，其中一株单克隆抗体标记生物素，另一株单克隆抗体标记吖啶酯。磁性微球上包被了链亲和素，通过SA放大系统结合生物素化抗体，同时捕获血清中的cTnI，然后结合吖啶酯标记抗体，最后形成固体夹心复合物，通过磁性分离，去除废液，进行检测，得到的发光值由标准曲线回算成浓度。

研究步骤：

（1）查阅相关文献，根据双抗夹心原理设计实验方案。

（2）对于所用诊断试剂的可靠性研究，突出检验结果的可信性与实际应用意义。

（3）进行实验操作，记录数据，并分析结果。

（4）通过大量实验与文献对照，得出标准曲线，从而推算血清中cTnI含量。

（5）利用有关资料，最终获得测量范围与灵敏度等试剂应用指标。

研究关键：

（1）实验操作中精细加样量的控制，对于研究结果具有较大影响。

（2）对于试剂长期性使用，需要有阶段性的校准与对照，保证结果一致性。

（3）对于重复性的稳定性实验，要保证实验条件的相同。

（4）浓度与发光值的标准曲线绘制

四．研究进度计划

研究工作的总体安排和进度：

1. 2015.3.2-2015.3.10 查阅相关文档、确定论文题目

2. 2015.3.11－2015.3.20 设计任务书，初步确立实验方案

3. 2015.3.21－2015.3.31 文献综述、外文翻译，撰写开题报告

4. 2015.4.1-2015.4.30 实验设计与实施，整理与记录数据

5. 2015.4.10－2015.4.20 中期检查

6. 2015.5.1－2015.5.15 数据分析，初步确定论文

7. 2015.5.20－2015.5.31 完成毕业论文初稿

8. 2015.6.1－2015.6.10 毕业论文最终定稿

9. 2015.6.10－2015.6.13 整理答辩材料，准备答辩

五．参考文献

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（2）王美华，罗伟波，吴肖仙 超敏肌钙蛋白Ｉ检测在早期急性心肌梗死中的应用价值 国际检验医学杂志2013,34(3)

（3）王义彦 冠心病心脏生物标志物的研究新进展 心血管病学进展 2013,34(2)

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（5）曾令恒，姜朝新，赵艳华，王陈龙，潘开拓 心肌标志物在诊断急性心肌梗死中的临床应用及诊断临界值分析 检验医学与临床 2013（9）

（6）魏景艳,牟颖,许海波,胡鑫,宋大千,刘霞,张寒琦,金钦汉,罗贵民 用多克隆抗体构建的夹心免疫传感器检测心肌肌钙蛋白I 高等学校化学学报 2003（12）

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