课题目的
分别用高效液相色谱法和紫外风光光光度法测定盐酸左氧氟沙星注射液的含量，比较两种方法的优缺点，为盐酸左氧氟沙星注射液的含量测定提供依据。
研究内容及方法
分别采用高效液相法和紫外分光光度法测定盐酸左氧氟沙星注射液，选择测定波长、制定标准曲线、试品含量测定、加样回收试验的对比，对两种方法进行比较。
成果形式
通过数据分析对两种方法进行比较，比较各自的优缺点。
工作进度
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序号 |
日期 |
计划完成内容 |
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1 |
2015年3月26日 |
学生接受任务书 |
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2 |
2015年3月26-31日 |
学生上传开题报告 |
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3 |
2015年3月-6月 |
学生进行毕业实习 |
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4 |
2015年4月10日 |
实习中期检查 |
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5 |
2015年5月30日 |
完成初稿并上传初稿 |
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6 |
2015年6月2日 |
学生返校 |
综述
左氧氟沙星含量测定方法学的研究
卢玉竹，中国药科大学，南京
[摘 要] 本文评述了2005年以来的十年间国内对左氧氟沙星含量测定的一些方法，对这些方法进行综合比较，着重评述了这些方法的应用及左氧氟沙星含量测定的研究进展。
[关键词] 左氧氟沙星 紫外分光光度法 含量测定 综述 高效液相色谱法
The methodology of the research content of levofloxacin hydrochloride
Lu Yuzhu, China pharmaceutical university, nanjing
Abstract In the decade since 2005 are reviewed in this paper some method for the determination of the content of levofloxacin, comprehensive comparison of these methods, focuses on the application of these methods are reviewed and the research progress on the content of levofloxacin.
Key word Levofloxacin hydrochloride Uv-spectrophotometry Content determination review HPLC
左氧氟沙星中文别名:（S）-（-）-9-氟-2，3-二氢-3-甲基-10-（4-甲基-1-哌嗪基）-7-氧代-7H - 吡啶并[1，2，3-de]-[1，4]苯并恶嗪-6-羧酸半水合物，为氧氟沙星的左旋体，抗菌谱广，抗菌活性强，其抗菌活性约为氧氟沙星的两倍，它的主要作用机制为抑制细菌DNA旋转酶（细菌拓扑异构酶Ⅱ）的活性，阻碍细菌DNA复制。通过查阅近十年的文献资料，笔者统计了其测定方法有：高效液相色谱法、近红外光谱法、拉曼光谱法、紫外分光光度法，其中高效液相法和紫外分光光度法运用的最多，高效液相色谱法也是药典规定的左氧氟沙星含量测定方法。
1 高效液相法
高效液相色谱法又称高速液相色谱法、高压液相色谱法或现代液相色谱法,它是在经典柱色谱角理论和实验基础上,引入气相色谱的塔板等有关理论和先进技术,并加以改进和发展起来的一门现代液相色谱学。高效液相色谱法的产生和发展已有近百年的历史[1]。
1.1色谱条件的选择
蔡佳玉等[2]测定微球中盐酸左氧氟沙星的含量采用 Agilent 1200 型高效液相色谱仪，色谱柱为 ZORBAX Eclipse XDB-C18 (4.6 mmtimes;150 mm，5 mu;m)，柱温：30 ℃，流速：1.0 mL·min，流动相：0.04 mol·L磷酸溶液(三乙胺调 pH 值为 4)-乙腈(85∶15)，检测波长：293 nm。实验中在流动相中添加了三乙胺调节pH=4，盐酸左氧氟沙星的峰型良好，在该流动相下，色谱分离效果良好，理论板数gt;5 000，盐酸左氧氟沙星保留时间为 4.18 min。
谢梅等[3]测定盐酸左氧氟沙星胶囊中左氧氟沙星的含量采用色谱柱Eclipse XDB-C18,流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾（磷酸调pH2.8）-乙腈（82:18），流速1.0ml/min,柱温37℃，检测波长为293nm。在实验中!当柱温为25℃时保留时间延长，拖尾明显，检测灵敏度降低，将柱温由25℃调升至37℃时，峰形较对称，且出峰时间提前,故选择了37℃柱温。
廖钟财等[4]测定盐酸左氧氟沙星葡萄糖注射液中左氧氟沙星的含量采用色谱柱:Kromasil 100-5 C18柱(250 mmtimes;4.6 mm,5mu;m);流动相:0.05 mol·L-1枸橼酸(用三乙胺调节至pH 4.0)-乙腈(82∶18);检测波长:293 nm;流量:1.0 ml·min-1;进样体积:20mu;l
申东浩等[5]测定盐酸左氧氟沙星原粉中左氧氟沙星的含量采用十八烷基硅烷键合硅胶柱（C18250,4.6mm Cat.no:99903 Sn:8038771）乙烷磺酸钠－甲醇（3：1）为流动相，流速1.0ml/min，进样量 10mu;l 检测波长 293nm，柱温 40℃.。
王晓阁等[6]测定在不同输液中盐酸左氧氟沙星的含量采用色谱柱:Eclipse XDB-C18（150mm )4.6mm，5um）；流动相：己烷磺酸钠溶液 - 甲醇（3：1）；流速：1.0ml/min；检测波长为 293nm，柱温 40℃。
洪丽萍等[7]测定盐酸左氧氟沙星片的含量选用安捷伦公司的 XDB C18 柱 (150 mmtimes;4.6 mm, 5 mu;m) 为色谱柱 ；以醋酸盐缓冲夜 (pH 值为 3.0)- 乙腈 (45 ：55) ；流速 1.0 ml/min ；检测波长为 295 nm ；柱温 ：30℃ 。
闫瑾等[8]选用色谱柱：日本岛津 Shimadzu C18（150mmtimes;4.6 mm，5 mu;m）；流动相：甲醇-0.05 mol·L－1磷酸二氢钾（V/V＝55∶45），流速：1.0 mL·min－1；柱温：25 ℃；检测器：紫外检测器；检测波长：310 nm；进样量：20 mu;L。
试验采用不同比例的甲醇-0.027 5 mol·L－1磷酸二氢钾流动相，结果显示比例为50∶50时，峰形不好；比例为60∶40时，盐酸左氧氟沙星和盐酸丁卡因分离度＜1.5，不符合要求；所以考虑选用甲醇-0.027 5 mol·L－1磷酸二氢钾（V/V＝55∶45），其柱效、分离度均符合测定要求，但盐酸左氧氟沙星的峰有拖尾现象。故考虑提高磷酸二氢钾的浓度，选用甲醇-0.05mol·L－1磷酸二氢钾（V/V＝55∶45）的流动相后，拖尾现象得到改善，峰形美观。
丁燕等[9]测定盐酸左氧氟沙星胶囊中左氧氟沙星含量采用色谱柱：Phenomenex Luna C18柱（250mmtimes;4.6mm,5 mu;m）;流动相：0.05mol/L枸缘酸溶液-1mol/L醋酸铵溶液-乙腈（77:1:4）；流速：1.0mL/min;柱温：30℃；检测波长：293nm;进样量：10 mu;L。在此色谱条件下，左氧氟沙星峰的理论塔板数大于2500，分离度符合要求。
杨靖等[10]测定注射用盐酸左氧氟沙星的含量采用 色谱柱：XDB C18（150mmtimes;4.6mm,5 mu;m），流动相：己烷磺酸钠溶液rsquo;取己烷磺酸钠 0.89g,加磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾6.8g；加水溶解并稀释至 1000ml，加 0.05mol/L 磷酸溶液约 500mL，使 pH 值至2.4)1000mL，使溶解，摇匀，即得]-甲醇（3:1）。流速 1.0ml/min，检测波长 293nm，柱温 40℃，进样量10 mu;L。
易大为等[11]用手性流动相测定盐酸左氧氟沙星的含量采用色谱柱: Diamonsil C18色谱柱(150times;4. 8mm,5mu;m );流动相Ⅰ(离子对流动相):含0. 098%己烷磺酸钠的磷酸盐缓冲液(0. 05mol/L, pH2. 4)-甲醇(3∶1);流动相Ⅱ(手性流动相): 0. 1%硫酸铜-0. 15% L-苯丙氨酸溶液(pH3. 5)-甲醇(80∶20);检测波长293nm;流速1. 0m l·m in-1,柱温40,进样量。理论塔板数大于1500。实验中将将原标准中的0. 03mol/L盐酸溶液改成0. 03mol/L醋酸溶液,是考虑到氯离子对色谱仪管路的腐蚀作用,在配制流动相以及稀释样品时应尽量避免引入盐酸。另经考察醋酸在测定条件下不与流动相中的硫酸铜反应生成沉淀。故认为,用醋酸代替盐酸溶解并稀释样品是可行的。
杨森森等[12]在盐酸左氧氟沙星滴眼液的制备及其含量测定方法的确认中用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂:以己烷磺酸钠溶液:醇(3:1)为流动相。己烷磺酸钠溶液的制备：取己烷磺酸钠0.98g,加磷酸 盐 缓 冲 液1000mL,使溶解,摇匀，即得；磷酸盐缓冲液的制备：取 磷 酸 二 氢 钾6.8g加 水 溶 解 并 稀 释 至1000mL,加0.05mol/L磷酸溶液约500mL,使pH值至2.4。柱温为40℃检测波长为293nm，进样量为10mu;l。
许晓文等[13]在盐酸左氧氟沙星含量测定方法研究中采用色谱柱：大连依利特KromasilODS2柱(200times;4. 6mm,5mu;m );流动相：己烷磺酸钠溶液[取己烷磺酸钠0.98g,加磷酸 盐 缓 冲 液1000mL,使溶解,摇匀，即得]-甲醇（2:2）；磷酸盐缓冲液的制备：取 磷 酸 二 氢 钾6.8g加 水 溶 解 并 稀 释 至1000mL,加0.05mol/L磷酸溶液约500mL,使pH值至2.4。柱温为40℃检测波长为293nm，进样量为10mu;l。记录色谱图，结果相对于主峰保留时间约为1.2倍处检测到杂质峰；理论塔板数按左氧氟沙星峰计算高于1500。
2 近红外光谱法
红外光谱法又称“红外分光光度分析法”。是分子吸收光谱的一种。根据不同物质会有选择性的吸收红外光区的电磁辐射来进行结构分析；对各种吸收红外光的化合物的定量和定性分析的一种方法。
宋岩等[14]运用红外光谱法应用于左氧氟沙星的在线分析，但是分析成本较高、分析工艺较为繁琐、分析时间长，所以国内很少用此法进行左氧氟沙星的含量测定。
3 紫外分光光度法
3.1 差示紫外分光光度法
白林等[15]用差示紫外分光光度法测定左氧氟沙星的含量，之前未有文献报告使用此法测定左氧氟沙星的含量，该法无干扰，方法简便准确、稳定性好，适用于左氧氟沙星的含量测定。
3.2 旋光-紫外分析法
周雪婉等[16]通过实验证明往左氧氟沙星溶液中加入氧氟沙星，对其旋光度及紫外吸收的影响在误差范围内，即对于同一种供试品溶液进行旋光测定和紫外测定，联合旋光-紫外分光光度法可以测得其中的旋光物质左氧氟沙星的含量，精密度、稳定性均符合规定，可以作为左氧氟沙星含量测定的方法。
3.3 紫外分光光度法
金鹏[17]、丁青龙 李莹 蔡春亚[18]、胡 萍[19]、景士云 张君颖[20]等用紫外分光光度法测定了左氧氟沙星的含量，线性关系良好，结果准确可靠，适用于左氧氟沙星的含量测定。
4 高效液相色谱与紫外分光光度法含量测定的比较
莫金娜等[21]以 0.1 mol/L HCL作溶剂的紫外分光光度法测定左氧氟沙星含量，结果与高效液相法测定的结果基本一致，且准确、简便、快速，他们认为紫外分光光度法可以作为药品生产单位的质量控制标准。
黄丹云[22]通过紫外分光光度法与高效液相色谱法的比较实验，认为高效液相法适合左氧氟沙星成品的含量测定，紫外分光光度法适合左氧氟沙星半成品的质量监控。
5结语
笔者通过近十年的文献查阅，发现左氧氟沙星的主要测定方法为高效液相法和紫外法，高效液相为药典规定的左氧氟沙星含量测定方法，紫外法因为操作简便也受到不少学者的认可。
参考文献
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分别用高效液相色谱法和紫外风光光光度法测定盐酸左氧氟沙星注射液的含量，比较两种方法的优缺点，为盐酸左氧氟沙星注射液的含量测定提供依据。
研究内容及方法
分别采用高效液相法和紫外分光光度法测定盐酸左氧氟沙星注射液，选择测定波长、制定标准曲线、试品含量测定、加样回收试验的对比，对两种方法进行比较。
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