课题背景：
自20世纪80年代以来，随着各种分子生物学技术的发展和抗体基因结构的进一步阐明，DNA重组技术开始广泛应用于抗体的改造，抗体制备技术已从多克隆抗血清、单克隆抗体发展到基因工程抗体。 目前制备的抗体多数用作研究工具，可定量测定蛋白浓度。本课题制备的为人源性抗体，其单克隆抗体是一类快速增长的有前途的定向治疗药物。
hMGH抗体是通过制备重组质粒然后转化筛选培养表达，从而免疫动物得到的人源抗体（兔抗人抗体）。
表达蛋白共有85aa,9kD大，其中含有His Tag和CPN1（羧肽酶N催化链），其中CPN1的序列为GIKGMVLDENYNNLANAVISVSGINHDVTSGDHGDYFRLLLPGIYTVSATAPGYDPETVTVTVGPAEPTLVNFHLKRS
当前，常用于生产小分子抗体片段的表达系统通常有大肠杆菌（E.coli）表达系统、酵母表达系统、昆虫细胞表达系统和哺乳动物细胞表达系统4种。E.coli 表达系统是基因表达技术中发展最早，应用比较广泛的经典表达系统，经常用来表达 Fab、ScFv等小分子抗体。 重组质粒的表达使用E.coli大肠杆菌表达系统，是基因工程中应用最广泛的表达重组蛋白的系统。
多抗通过免疫动物得到抗血清，单抗通过免疫动物得到脾脏细胞和瘤细胞进行融合，再打腹水获得。多抗含有多个抗原决定簇，可刺激具有多种抗原决定簇的多数天然抗原注入机体后，可刺激多个B细胞克隆发生免疫应答，产生多种相应的抗体组成的亲和力不同的混合物。比单抗的免疫效果好。其免疫学活性检测使用间接ELISA，从而获得其效价和浓度，以此判断制备的抗体的活性。而抗体很重要的另一特性为亲和力，通过在ELISA之前的比对确定。
表达蛋白中含有His-Tag序列，使用His Resin纯化抗体。
目前抗体应用主流及热流，应用中的难点及应对措施。
实验流程：
- 重组质粒构建及目的蛋白表达
- 免疫动物获得抗血清及脾脏制备单抗
- 抗体纯化
- 抗体检测及评估
- 抗体保存
- ELISA检测试剂盒
- 乳胶沉淀
- 免疫荧光分析
- 流式细胞分析
预期结果：
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