一、研究背景及意义
黑色素瘤是一种发病率极高、极具侵染性的恶性皮肤癌。近三十年来，其世界范围内发病率持续升高。对于黑色素瘤的治疗目前主要采用外科手术和化疗相结合的方法，但黑色素瘤很容易对化学药物产生耐药性，从而限制了其使用。随着实验技术的不断进步以及对细菌基因组学的深入了解，利用细菌介导的肿瘤治疗途径得以迅速发展。鼠伤寒沙门氏菌是一种杆状革兰氏阴性菌，具有肿瘤靶向性。小鼠肿瘤模型中，沙门氏菌VNP20009 具有良好的肿瘤靶向性和抑瘤效果，但是在I 期临床试验中，其肿瘤靶向能力和抗肿瘤效果均不显著。因此，肿瘤靶向细菌作为一种全新的肿瘤治疗方法，目前还有许多有待深入研究和改进之处。有研究表明：HtrA蛋白与沙门氏菌抗肿瘤效果密切相关，因此本研究利用基因工程等手段来进一步探究HtrA在减毒沙门氏菌VNP20009中的具体抗肿瘤效果，进而构建出完美的沙门氏菌载体。
二、拟研究或解决的问题
1 HtrA 基因对VNP20009生长的影响；
2 HtrA 基因对VNP20009在小鼠模型中的毒性影响；
3HtrA 基因的抑瘤效果分析
三、采用的手段
本课题拟构建黑色素瘤小鼠模型，通过Red同源重组手段得到HtrA敲除的VNP20009突变菌株并注入到小鼠体内，观察肿瘤的生长情况，探讨HtrA对减毒沙门氏菌VNP20009抗肿瘤作用的影响。
3.1重组DNA制备
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