文献综述
一、冬虫夏草的简介
冬虫夏草(Cordycepssinensis)别名虫草、冬虫草、夏草冬虫,属于真菌门(Eumycota)、子囊菌亚门(Ascomycotina)、麦角菌科(Clavicipitaceae)、虫草属(Cordyceps),为一种寄生于鳞翅目昆虫蝙蝠蛾幼虫中所形成的虫生真菌[1,2]。冬虫夏草是一味传统中药,也是我们熟知的名贵中药材,具有多种药用功能,并且可作为食材用于烹调食物,具有较高的保健价值。中医认为,冬虫夏草入肺肾二经,既能补肺阴,又能补肾阳,主治肾虚,阳痰遗精,病后虚弱,腰膝酸痛,久咳虚弱,自汗盗汗,劳咳痰血等,是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药【3】。
二、冬虫夏草人工培养研究概况
冬虫夏草是一种子囊菌,在其生活史中具有分生孢子阶段(无性型)和子囊孢子阶段(有性型)。在人工培养、液体发酵等实际生产中使用的冬虫夏草菌种均为无性阶段,故而其无性型问题特别引人关注。只有经过严格验证的无性型菌种才能称为冬虫夏草的无性型。传统的验证方法有子实体的人工诱发和子囊孢子的微循环产孢等。90年代后期,分子生物学方法开始应用于虫草无性型的验证,从一定程度上弥补了传统方法的不足。并且,各种菌种的命名也很混乱,目前市场上主要流通的是冬虫夏草无性型的菌种有:中国被毛孢(Hirsutellasinensis)、蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyceshepiali)、蝙蝠蛾被孢霉(Hirsutellahepiali)、虫草头孢(Cephalosporiumsinensis)等。其中蝙蝠蛾拟青霉以及蝙蝠蛾被毛霉已被确认为非冬虫夏草无性型。近年来报道从冬虫夏草上分离出来的无性型有很多,但只有中国被毛孢(Hirsutellasinensis)经接种蝙蝠蛾幼虫,并完成了从染菌直到长出子实体的全过程,证明是冬虫夏草的无性型菌株[4],冬虫夏草头孢(Cephalosporiumdongchongxiacae)、虫草头孢(Cephalosporiumsinensis)、蝙蝠蛾被毛孢(Hirsutellahepiali)和中华束丝孢(Synnematiumsinense)等也已被证明是中国被毛孢(Hirsutellasinensis)的同物异名。[5,6]
三、人工虫草的发酵工艺
目前对冬虫夏草发酵的研究主要包括菌的筛选、液体发酵工艺的摸索、固体发酵技术的开发和发酵产物的评价及应用几个方面。[7]蛹虫草的液体培养是指将蛹虫草生长所需的各种营养物质加到水中溶解制成液体培养基,在合适的通氧、温度条件下对菌体进行培养,使之形成菌丝体。研究发现,液体发酵法培养的蛹虫草菌丝体与蛹虫草子实体含有相同的有效成分[8]。并且液体发酵法生产蛹虫草菌丝体具有发酵周期短、发酵效率高、产物易于提取等优点,所以近年来人们对于蛹虫草的液体发酵工艺研究较多。与液态发酵相比,固态发酵具有原料简单、子实体产量大、产物易于提取、污染少等优点。但也由于在固体基质中,培养基的pH、湿度等不易检测,实验重现性较差等缺点给固态发酵工艺的研究带来不便。虽然,发酵工艺已经研究成熟,但是由于菌种不同,最佳发酵工艺也有所差异。培养优良的子实体应该颜色鲜亮,为橙黄色,且子实体饱满健壮,子实体产量高。[9]葛飞等以麦角甾醇含量为指标,对冬虫夏草无性型,即中国被毛孢的固体发酵进行研究,发现固体发酵最佳培养基为大米5g、玉米粉2g、蚕蛹粉1g、麦麸2g,适宜的培养条件为培养温度20℃、料水比1:1.5、料层厚度2cm,且无光照时对菌丝生长较为有利,所得菌丝体的麦角甾醇含量较未优化的提高了38.6%[10]。
四、材料与方法
A菌种冬虫夏草无性型中国被毛孢(HirsutellasinensisLiu,Guo,YuetZeng.)
B培养基[11]牛肉水(1∶2)50%,蛋白胨0.5%,酵母粉0.1%,葡萄糖3%,牛奶
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