一、 拟研究的问题在早期的一些研究中，哺乳动物的谱系追踪仅限于通过使用染料或荧光蛋白对一小部分细胞进行追踪，虽然这些技术一定程度上解决了早期发育过程中细胞谱系中命运决定的一些关键性问题，但是可供分析的细胞数量较低这一缺点大大限制了人们对于组织干细胞在发育中的动态变化过程中的研究。
随着单细胞测序技术通量的提高，高通量的单细胞测序技术开始被用于谱系追踪。
并且，通过CRISPR/Cas9系统可在体内进行基因编辑，进而在细胞中创建了各种可识别的DNA条形码，CRISPR/Cas9基因编辑技术为细胞谱系追踪在体内的应用打开了一扇大门。
于是，本课题拟建立一种基于CRISPR/Cas9的新型谱系示踪技术。
二、采用的研究手段1.构建谱系示踪质粒分别构建Targets和iCas9质粒。
在Targets质粒中设置三段gRNA序列和三段靶点序列，gRNA序列与靶点序列产生的特定错配情况会导致不同的基因编辑动力学效应；在iCas9质粒中设有Tet-on诱导元件，用于在dox诱导下启动Cas9表达。
构建的谱系示踪质粒可以在目标时间内持续产生新的编辑信息。
2.在293T细胞中进行测试先进行质粒转染，然后对构建好的293T谱系示踪细胞株进行测试：向细胞培养液中加入dox启动基因编辑过程，在细胞培养到第2、4、6、8、10天的时候，提取相应的mRNA和DNA，对靶点区域进行扩增，然后将PCR产物进行Sanger测序、核酸片段大小分析等。
视样品情况考虑是否进行二代测序，获取基因编辑过程的动力学参数。
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