1、立项依据
（1） NAG-1基因属于 TGF- beta;超家族成员之一 ,其编码产物能抑制某些肿瘤细胞生长及诱导凋亡。TGF- beta; 超家族在调节细胞生长、分化、基质形成和凋亡等方面具有广泛活性。NAG -1高表达可致肿瘤细胞生长停滞和凋亡, 具有抗肿瘤形成和促凋亡活性, 故与肿瘤演进和发展密切相关, 受到广泛关注, 成为近年研究的热点。
（2） 千层纸素(oroxylin A) 属于黄酮类化合物，也是中药黄芩的的有效成分之一，千层纸素具有很强的抗肿瘤生物活性， 其作用机制可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡，逆转肿瘤细胞耐药性，抑制肿瘤细胞侵袭和转移，诱导肿瘤细胞周期阻滞，抑制肿瘤血管生成等发挥其抗肿瘤作用。因NAG-1基因的表达和千层纸素都能引起癌细胞凋亡，且有研究表明千层纸素的促癌细胞凋亡作用与上调非甾体抗炎药物激活基因NAG-1。目前关于千层纸素对NAG-1基因表达的影响关注较少。对探索千层纸素对肝癌细胞NAG-1基因表达是否具有的调控作用，对理解千层纸素对肝癌的治疗机制具有重要意义。
2、研究手段
本课题主要采用 RT-PCR方法检测HepG2肝癌细胞株 N AG-1基因表达的影响情况。并拟采用MTT检测、免疫印迹等实验手段和技术，研究千层纸素对肝癌细胞NAG-1基因表达是否具有的调控作用。
3、拟解决的问题
3.1体外细胞培养
人肝癌HepG2细胞在经过0.22mu;m滤膜过滤的DMEM培养液中，在37 ℃、 5% CO 2,饱和湿度条件下培养,用1x的PBS配制的0.15%胰蛋白酶（含有0.02%的消化细胞），每3d一次，以供实验研究之用。人肝癌细胞株接种后第3天换液,即在容积为25ml的培养瓶加4ml培养液。一般2~4d左右人肝癌细胞贴壁达到70%以上，在倒置相差显微镜下可见多边形、折光性好的透亮细胞，以后每2d更换培养液1次，直至细胞贴壁率达到90%、细胞状态良好时就可以对细胞进行各种操作。
3.2 M T T 实验
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