编码硫酸乙酰肝素C-5-异构化酶的基因GLCE基因对beta-分泌酶功能的影响文献综述

 2023-01-07 02:01

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

课题背景:硫酸乙酰肝素酶是哺乳动物细胞中beta;-D-糖苷内切酶,能降解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖糖链(heparan sulfate proteoglycans,HSPGs),参与细胞外基质和基底膜重建[1]。此外,该酶也表达于粒细胞,星形胶质细胞,神经元和大鼠脊髓白质神经胶质等正常细胞[2]。而GLCE基因能表达硫酸乙酰肝素C5异构酶,该基因敲除后在小鼠中出现阿尔茨海默症状。根据阿尔茨海默发病机制——Abeta;级联学说,我们了解到beta;-分泌酶通过剪切淀粉样蛋白前体(amyloid precursor protein,APP)产生大量beta;-淀粉样蛋白而导致发病。因此我们从基因角度探索GLCE基因对beta;-分泌酶功能的影响,从而进一步证明GLCE基因在阿尔茨海默症状中的作用。

大鼠嗜铬瘤PC12细胞在神经生长因子(NGF)作用下能分化为交感神经样细胞。由于硫酸乙酰肝素酶广泛表达于神经系统,故我们以NGF诱导PC12细胞神经突生成为模型,研究硫酸乙酰肝素酶在神经突生成中的作用。

实验流程:

1.细胞复苏(pc12cell),2天后传代

2细胞传代,分组(black/normal/over/knockdown),2天后慢病毒感染

3慢病毒感染,构建over/knockdown组

1)铺板:将细胞消化重悬后,按1*105/L密度接种于12孔板,生长过夜

2)感染:将70-80%铺满12孔板中的培养液吸除,换新鲜的培养液,同时加入PBS浓度梯度稀释的病毒液,混合均匀后即可放入孵箱培养。

3) 24h左右可换液,48小时即可看荧光,具体根据细胞状态来看。

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