开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、课题研究内容
随着人口平均年龄的增长，老年性痴呆成为公共健康的主要威胁之一。老年性痴呆主要分为阿尔兹海默病、血管性痴呆和混合型痴呆，其中血管性痴呆是在亚洲国家最常见的痴呆类型。影像学研究显示，在老年人和痴呆患者皮层下和脑室周围经常可以检测到白质损伤，白质损伤会导致运动能力受损、认知功能下降。
慢性脑缺血引起的脑白质损伤常见于老年人、心脑血管疾病和血管性痴呆病人，被认为是血管性认知障碍发生、发展的重要因素。脑白质由被髓鞘包围的神经轴突组成，控制神经元间信号传递，协调脑区间的运作。在中枢，少突胶质细胞是构成髓鞘的唯一细胞，它对缺血缺氧极其敏感，极易受到缺血缺氧的损伤。少突胶质细胞受到脑缺血损伤做引起的脱髓鞘现象是造成白质损伤的重要原因。另外，脑白质区含有大量炎性胶质细胞，在脑缺血时会被激活而释放出多种炎性介质导致脑白质损伤。
依据抗原表达、形态和功能，少突胶质细胞系可分为先祖细胞、早期少突胶质祖细胞、晚期少突胶质祖细胞、未成熟少突胶质细胞、成熟少突胶质细胞，共 5 个发育阶段。PI3K/Akt和MAPK/Erk通路对少突胶质细胞前体细胞的分化和少突胶质细胞的存活起着重要作用。另外，由脑缺血所致白质损伤区域TNF-alpha;增多，其可通过caspase-3促进少突胶质细胞凋亡。
在前期实验中，通过小鼠跳台法检测了药物A对东莨菪碱致学习记忆障碍模型的影响，发现药物A能够明显改善其学习记忆能力，潜伏期改善率为75%（Plt;0.05），动物错误次数及跳下动物数均降低。随后，采用Morris水迷宫实验发现药物A有效改善永久性双侧颈总动脉结扎致大鼠慢性脑缺血模型的学习能力，明显增加了动物穿越平台区域的次数、原平台象限游泳时间/总时间，降低了首次穿越平台的时间。这提示药物A具有血管性痴呆的治疗前景，推测其可能通过炎症通路以及促进少突胶质细胞的成熟分化并抑制其凋亡改善脱髓鞘现象，从而减少脑白质损伤，改善学习记忆能力。本实验就此推测进行药物A的作用机制进行探索。
二、实验内容和方法
首先应用Luxol fast blue (LFB)染色、淀粉样前体蛋白（beta;-APP）的表达观察脑缺血大鼠白质的变化。①LFB染色：大鼠脑组织冰冻切片后裱于多聚赖氨酸包被的玻片，经0.1%LFB染料染色，0.05%碳酸锂溶液和70%的乙醇分化至灰、白质区分清晰，常规脱水，中性树胶封片。光学显微镜下观察胼胝体部位白质的变化。②beta;-APP免疫组化：大鼠脑组织灌流、固定、沉糖后，冰冻切片机切片20mu;m，封闭后与beta;-APP抗体孵育4℃过夜，然后与二抗孵育，封片后，于光学显微镜下观察、拍照、分析阳性细胞数。
然后利用western blotting检测胼胝体中MBP表达量变化。大鼠处死分离大脑胼胝体提取总蛋白，以BSA为标准蛋白利用BCA法测定蛋白浓度后按照每泳道30mu;g总蛋白上样，进行SDS-PAGE电泳，分离后转至PVDF膜进行化学发光免疫印迹检测。
接着采用免疫荧光双标法检测少突胶质细胞前体细胞（OPCs）和少突胶质细胞（OLs）细胞的变化。大鼠建模24h后，连续7d腹腔注射BrdU（50mg/kg）。动物于注射结束后30d处死。通过检测CNPase/BrdU阳性细胞和CNPase/ssDNA阳性细胞数量的变化（CNPase为OLs特异性标志物，BrdU为确定新生细胞的标志物，ssDNA为检测细胞凋亡的标志物）。确定药物A对OPCs分化和少突胶质细胞存活的影响。分组如下：sham组、model组、药物A-20mg/kg组。大鼠脑组织灌流、固定、沉糖后，冰冻切片机切片20mu;m，封闭后与CNPase、BrdU、ssDNA抗体孵育4℃过夜，然后与FITC和Cy3二抗孵育，封片后，于激光共聚焦显微镜下观察、拍照、分析阳性细胞数，确定药物A对OPCs分化和OLs存活的影响。
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
