[课题名称]
建立血清中酯化脂肪酸和游离脂肪酸的GC-MS定量分析方法。
[研究的主要目的和意义]
脂肪酸是脂肪酸(fatty acids)是一类羧酸化合物，由碳氢组成的烃类基团连接羧基所构成，是中性脂肪、磷脂和糖脂的主要成分。它是人体内的一种重要能量来源,同时参与细胞增殖、炎性反应、激素调控等,也是一种具有多种生理功能的信号分子。存在于人体内的脂质，大致可以分为胆固醇、中性脂肪（三酸甘油脂）、磷脂质、游离脂肪酸等4种。游离脂肪酸又称非酯化脂肪酸（nonestesterified fatty acid NEFA）。生物样本中的脂肪酸组成及含量变化是评价机体脂肪酸摄入和能量代谢的重要标志，建立一种简洁、快速的分析方法对脂肪酸进行定性或定量具有重大的意义。
近年来很多研究表明脂肪酸代谢异常和脑炎以及神经炎等疾病有很大联系。如进行性多发性硬化（MS），是以中枢神经系统白质炎性脱髓鞘病变为主要特点的自身免疫病，本病最常累及的部位为脑室周围白质、视神经、脊髓、脑干和小脑。生物素是充当辅酶参与能量代谢和脂肪酸合成的关键步骤羧化酶维生素。在对原发性和继发进展型MS进行高剂量生物素的治疗中，有的病人患有突出的视力障碍与视神经损伤，通过治疗视力有了显著的改善，而且胆碱/肌酸比值的逐步正常化。
再比如CPT II基因缺失引起的CPT II缺乏症，是线粒体脂肪酸beta;-氧化的先天性代谢错误引起的。对儿童脑炎的发高烧和恢复期进行研究，发现患者CPT II活性和血三磷酸腺苷浓度有显著变化。结果表明变异的CPT II基因可能是急性脑炎的病变因素，而这种变化可能是由于CPT II基因变异引起线粒体脂肪酸代谢异常而产生的。
还有肾上腺脑白质营养不良(ALD)，是一种最常见的过氧化物酶体病，细胞中过氧化物酶体对VLCFA（非常长链脂肪酸）的氧化发生障碍，以致VLCFA在血、脑白质、肾上腺皮质等器官和组织内大量聚积，引起中枢神经系统脱髓鞘和肾上腺皮质萎缩或发育不良。几乎所有的男性X-ALD患者在童年出现渐进性脊髓病，并在成年后外周神经病变肾上腺皮质功能不全。VLCFA在神经系统中聚集可破坏髓鞘的正常形成和髓鞘的稳定性，在肾上腺皮质细胞中聚集可引起肾上腺皮质细胞膜表面的ACTH受体功能下降，细胞内类固醇合成受抑制，而致肾上腺功能减退。
GC是目前国内应用最广泛的检测脂肪酸的方法，其具有检测灵敏度高、分离度好、重复性佳、检出限低等特点。GC的分析对象一般为可挥发性、热稳定性样品。而这部分物质仅占所有化合物的17%左右。另一部分样品经过衍生化后，其极性降低，挥发性和热稳定性增加，从而可进行GC分析。甲酯化是用于游离脂肪酸衍生化的经典方法，此外还有还有酰化、硅烷化等方法。在检测脂肪酸方面，GC为主要分析方法，其在灵敏度方面具有较高优势。但是在测定沸点高、相对分子质量大、不易挥发的物质时存在局限性。
而采用HPLC则对高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物具有最佳分离效果。本实验只用GC测定血清中酯化脂肪酸和非酯化脂肪酸。
气质联用法用于微量或痕量分析，综合了气相和质谱的优点，弥补了各自的缺点，因而灵敏度高，分析速度快，鉴别能力强，可同时完成待测组分的分离和鉴定，特别适合用于多组分混合物中未知组分的定性、定量分析。对挥发性成分可直接进行定性定量分析；对不挥发成分和热不稳定的物质，可做成适宜的挥发性衍生物再进行分析。而且气质联用法已有成熟的商品化标准谱图数据库，可对未知化合物进行快速检索和鉴定，是一种较为理想的脂肪酸分析技术。酯化脂肪酸和非酯化脂肪酸沸点较低，易于用GC-MS定性和定量。
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