开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
1、国内外研究现状（文献综述）：
血管内皮生长因子(VEGF)是一个重要的血管形成因子,与诸多的生理及病理过程有关。许多肿瘤细胞均可分泌VEGF,后者可诱导肿瘤血管形成,从而支持肿瘤生长。通过阻断肿瘤血管形成抑制肿瘤生长的设想始于70年代，1970 年，Folkman首次提出“肿瘤生长依赖于血管生成”的观点，后又提出血管生成切换的概念，即将肿瘤的生长分为两期：(1)血管前期又称无血管期，肿瘤细胞处于休眠状态；(2)血管期，肿瘤细胞分裂、生长、转移。在无血管期，由于肿瘤主要依靠周围组织的弥散来获取营养物质和排泄代谢产物，所以明显抑制了其持续生长，肿瘤直径不超过1－2mm ；而到血管期，肿瘤内出现新生血管，并获得进一步生长的能力，肿瘤从而迅速生长并可发生转移，肿瘤的生长和转移是抗肿瘤失败的主要原因。因此，控制肿瘤血管的生成成为肿瘤治疗的一种新方法。抗VEGF抗体是VEGF的中和抗体, 能中和肿瘤细胞释放的VEGF , 进而阻断VEGF与其血管内皮细胞上特异性受体结合, 阻断血管形成。
荧光标记技术起源于20 世纪40 年代，最初用于标记抗体以检测相应的抗原。荧光标记技术是指将能发射荧光的物质通过共价结合或物理吸附等方式标记于所研究分子的某个基团上，用它的荧光特性来反映研究对象的信息。利用荧光标记试剂与被研究对象( 核酸、蛋白、多肽等) 吸附或共价结合后其荧光特性发生改变，从而反映出有关研究对象性能的信息。荧光物质是具有共轭双键体系化学结构的化合物, 受到紫外光或蓝紫光照射时, 可激发成为激发态, 当从激发态恢复至基态时, 发出荧光。荧光的特点是灵敏、特异、准确、快速。荧光标记示踪技术的基本原理是将荧光物质与待测物通过化学反应以共价键连接, 通过荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等仪器的检测, 达到定位、示踪、含量测定等目的, 并被广泛的应用于生物化学、免疫学、分子生物学、病理学和诊断学等方面。荧光标记具有非放射性、操作简便、稳定性高、灵敏度高和选择性好等特点，可广泛应用于细胞内外物质检测、组织及活体动物标记成像、药物分析、病理模型研究及疾病早期诊断等，在生物医学研究领域里发挥着重要的作用。荧光标记技术采用荧光素、量子点等对目标物进行标记，不具有放射性。覃光炯等以异硫氰酸标记的牛血清白蛋白作为标记药物( FITC-BSA) ，建立了同步荧光法考察FITC-BSA 在大鼠体内的药代动力学特征。检测过程中激发波长和测定波长同时变化，可有效减少血浆中杂质对FITC-BSA 荧光检测的干扰。
活体动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光两种技术。生物发光是用荧光素酶基因标记细胞或DNA，而荧光技术则采用绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白等荧光报告基因和FITC、Cy5、Cy7 等荧光素及量子点进行标记。小动物活体成像技术是采用高灵敏度制冷CCD 配合特制的成像暗箱和图像处理软件，使得可以直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。实验者借此可以观测活体动物体内肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。由于具有更高量子效率CCD 的问世，使活体动物体内光学成像技术具有越来越高的灵敏度，对肿瘤微小转移灶的检测灵敏度极高;另外，该技术不涉及放射性物质和方法，非常安全。因其操作极其简单、所得结果直观、灵敏度高、实验成本低等特点，在刚刚发展起来的几年时间内，已广泛应用于生命科学、医学研究及药物开发等方面。
2、拟研究的问题：
本课题研究的内容主要是以下几个方面：
一、VEGF抗体的荧光标记方法的建立：
（一）荧光染料的选择；
（二）标记条件的确定；
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