开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 研究背景及进展
人乳铁蛋白是一种具有广泛生物学活性的铁结合糖蛋白。有抑菌、抗癌、抗氧化、免疫调节等很多生物学功能。由于它独特的理化性质与生物学功能，人乳铁蛋白在食品、饲料、医疗方面广泛运用。具有广谱抗菌,抗病毒,抗炎症,调节骨髓生成及免疫调节等多种功能$在人类保健和疾病防治等方面起着重要的作用但是hLF来源很匮乏并且在加工过程中容易受到污染。所以开发重组人乳铁蛋白成为研究的热点及趋势，通过乳腺生物反应器以低成本创造大量的乳铁蛋白。通过哺乳动物乳腺生产外源蛋白,具有成本低,分离纯化简单,产量高,不易受污染,也不污染环境,可持续生产,尤其是所表达的外源蛋白可进行翻译后加工,具有天然蛋白的结构及活性等优点[1～3],据美国红十字会预测,至2005年,全美转基因动物生物反应器生产的药物每年价值可达350亿美元,2010年,所有基因工程药物中利用转基因动物生物反应器生产的份额将高达95%。乳腺生物反应器作为动物生物反应器中重要的类型,更加受到人们的重视。
荧光探针是以荧光物质作为指示剂，通过检测所产生的荧光实现对被检测物质的定性或者定量分析。它的分子中含有活泼的化学反应基团异硫氰基(— NCS), 在适当条件下, 易与蛋白质氨基酸的一级氨基形成共价键, 成为牢固的荧光染料-蛋白质结合物。FITC对所处微环境的变化具有很高的灵敏性, 非常适合作研究微环境变化的探针分子。荧光标记技术是借助荧光探测方法在分子水平上进行实时检测的重要手段, 这种技术灵敏性高, 可视性强, 生物体系中的背景噪音对其干扰少, 具有传统检测方法所不具备的优势。通过与电泳、色谱等方法的联用, 可多参数、实时获得更多的信息, 取长补短, 为在活细胞及整体层次动态追踪生物大分子结构变化提供新的、有效的研究手段。
- 研究的主题
1、重组人乳铁蛋白的荧光标记方法建立
2、重组人乳铁蛋白在药代动力学研究中的应用初探
- 研究的主要内容和方法：
- 查找相关文献，了解重组人乳铁蛋白的基本资料，包括分子量大小，物理化学性质。了解FITC的物理化学性质及其与其他蛋白的标记方法。
hLF是一条相对分子质量约为80KD的结合性糖蛋白,两条碳水化合物侧链位于其上,包含有1个唾液酸、5?6个半乳糖、15?16个甘露糖、1个岩藻糖、10~11个N-乙酰半乳糖胺[6],其中碳水化合物含量约占总量的7%。
FITC是一种重要的荧光探针。由于其荧光强度高，它的分子中含有活泼的化学反应基团异硫氰基(— NCS), 在适当条件下, 易与蛋白质氨基酸的一级氨基形成共价键, 成为牢固的荧光染料-蛋白质结合物。荧光探针是以荧光物质作为指示剂, 通过检测所产生的荧光实现对被检测物质的定性或者定量分析。由于荧光素量子产率高, 最大吸收/发射在492/525 nm附近, 因此大量的荧光素衍生物被合成并用作荧光探针。应每次新鲜配制并且避光反应避光保存。
2、了解荧光标记蛋白质的方法和注意事项，及其后期纯化的方法。
- 实验方案：
1、实验试剂与仪器：纯化的重组人乳铁蛋白、FITC、PH=7.4PBS缓冲液、高效液相色谱仪、分光光度计、小动物活体成像仪、20kd超滤管、三溴乙醇、醋酸。
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