开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
课题依据:
恶性肿瘤是严重威胁人类健康的常见病和多发病,我国每年新增肿瘤患者220万,死于肿瘤的总人数高达140万人,并且有逐年上升的趋势,而胃癌更是在我国各种恶性肿瘤中居首位。化学药物是肿瘤治疗中的一种非常重要的手段。
细胞凋亡(Apoptosis)是机体正常组织细胞在受到生理和病理性刺激后出现的、按一定程序发生的自发性死亡。肿瘤细胞的无限生长是肿瘤细胞凋亡受抑制的结果,凋亡障碍与肿瘤的发生、发展具有密切的关系,凋亡是体内细胞平衡的一个关键要素,细胞凋亡也已被用来作为评价抗肿瘤药物疗效的指标之一。目前研究认为,线粒体在细胞凋亡中起着重要的调节作用。
戊铂(E Platinum)是一种新型奥沙利铂衍生物。那么戊铂能否通过激活线粒体信号通路,诱导胃癌细胞BGC-825凋亡,还需要我们深入的研究。
拟解决的问题:
1. 戊铂引起胃癌细胞BGC-825凋亡
采用DAPI染色的方式观察是否存在细胞凋亡的现象。DAPI是一种特殊染料,能与细胞核中的DNA结合。凋亡过程中,染色质形态会发生变化,DAPI染色法就是以细胞核染色质的形态学改变作为指标来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA特异性染料有:Hoechst 33342、Hoechst 33258、DAPI。三种染料与DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。
2. 戊铂引起caspase家族等凋亡相关蛋白的表达
Caspases是近年来发现的一组存在于胞质溶胶中的结构上相关的半胱氨酸蛋白酶,它与细胞的程序性死亡,即细胞凋亡有关。其中,caspase 2,caspase 8,caspase 9和caspase 10参与细胞凋亡的起始;参与细胞凋亡执行的则是caspase 3,caspase 6和caspase 7,其中caspase 3和7具有相近的底物和抑制剂特异性,它们降解PARP,DFF-45(DNA fragmentation factor-45),导致DNA修复的抑制并启动DNA的降解。采用免疫印迹(western blot)的方法来判断是否有凋亡相关蛋白的表达。免疫印迹(western blotting)实验是一个用于蛋白质分析的常规技术,在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物,然后利用抗原-抗体的特异性反应从蛋白混合物中检测出目标蛋白,从而定量或定性的确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况。实验步骤为样品制备,电泳,转膜,封闭,抗体杂交,显色发光。
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