一、研究背景
一个理想的内参基因必须是稳定表达的，不受生物学或实验条件的影响。研究表明，在不同物种、不同发育时期、不同的环境条件下，内参基因的表达水平有时并不稳定。因此，针对不同情况选择合适的内参基因是定量分析检测目标基因表达准确性的前提。
剑叶龙血树Dracaena cochinchinensis (Lour.) S. C. Chen为天门冬科龙血树属常绿乔木。茎干受伤后分泌出红色树脂，提取龙血竭，有止血、活血、生肌之效，为治内外伤出血的要药。我国国家药品标准与海南、浙江等地方中药材标准规定剑叶龙血树与海南龙血树是我国龙血竭药材的基原植物。但它们均是国家二级保护植物，相关药企目前只能通过老挝、越南等东南亚国家进口提取原料来满足国内市场的需求。研究剑叶龙血树受伤害状态下的基因表达情况有助于掌握其树脂的形成机理，从而满足我国龙血竭的市场需求，保护剑叶龙血树的野生资源。此时，选择一个合适的内参基因就显得尤为重要。而关于剑叶龙血树在此方面的研究尚未见报道。本研究拟以剑叶龙血树的不同组织及不同伤害时间点的样品为材料，对内参基因的表达稳定性进行评价；并通过分析黄酮合成途径中关键酶基因在伤害处理后的表达量，对所筛选的内参基因进一步验证。
二、 研究内容
本研究将从剑叶龙血树转录组中选择8个管家基因作为候选内参基因，通过qRT-PCR试验，结合geNorm、Normfinder、Bestkeeper和RefFinder等软件进行分析，筛选出稳定的内参基因。并选择2个黄酮合成途径中关键酶基因作为目的基因，来验证筛选出的内参基因的稳定性，为后续剑叶龙血树qRT-PCR试验的准确性、科学性提供技术支撑。
(一) 材料
本研究选取生长健壮，无病虫害，生长环境相同的剑叶龙血树3棵，对根、茎、叶、花、果进行取样，设置三个生物学重复。另外，在每棵树的主茎健康部位的同一侧，用酒精消毒后的砍刀自上而下割取长约3 cm、宽约1 cm，深约1 cm的伤口，分别在割伤后0h、2 h、6 h、12 h、24 h、3 d、5 d、10 d、15 d、30 d在其伤口处进行取样。上述样品取样后迅速放入液氮中冷冻，置于-80 oC冰箱保存备用。
(二) 步骤
总RNA的提取及cDNA的合成：采用RNA试剂盒提取各样品RNA，通过超微量可见分光光度计和1%琼脂糖凝胶电泳检测样品RNA的纯度与完整性。在样品RNA纯度高、完整性好的前提下，利用反转录试剂盒合成样品cDNA，-20 oC保存。
