Myosin II 的抑制剂Blebbistatin对线粒体裂分介导心肌细胞凋亡的保护作用研究课题性质 radic;基础研究应用课题 设计型 调研综述 理论研究拟研究的问题：线粒体是一种高度动态变化的细胞器，在细胞中不断融合与分裂，形成紧密连接的线粒体网络。
在缺血再灌注的心肌中，线粒体的分裂明显增加，而调控线粒体融合与分裂可能是药物治疗心肌缺血再灌注损伤潜在的靶点。
Blebbistatin是非肌球蛋白Ⅱ具有选择性抑制作用的小分子化合物。
它是一种细胞渗透性抑制剂，能够轻易穿过细胞膜，是在研究NMHCⅡA功能时最常用的抑制剂，其具有相对特异性。
本研究拟探讨Blebbistatin对线粒体裂分介导心肌细胞凋亡的保护作用及机制，为课题组后期探讨 NMHCⅡA在线粒体裂分介导心肌细胞凋亡中的分子机制提供实验基础。
采用的研究手段：（一）MTT检测Blebbistatin对OGD/R模型下H9c2心肌细胞活力的影响H9c2心肌细胞在培养皿中生长至融合状态，采用胰蛋白酶溶液消化，并反复吹打至细胞悬液，以含10 % FBS的DMEM培养基稀释成8104 个/mL，每孔100 mu;L接种于96孔培养板中，在37C，5% CO2条件下培养24 h，成融合状态.。
实验设定为空白对照组、OGD6h/R6h模型组，给药组Blebbistatin（浓度为0.01mu;M、0.1mu;M、1mu;M）,每组五个复孔，作用24 h后MTT法检测Blebbistatin对H9c2心肌细胞作用。
MTT法测定细胞活力：各组细胞弃去培养基，PBS洗两次，每组加入0.5 mg/mL MTT，37C，5% CO2条件下孵育4 h，除去MTT工作液，每孔加入150 mu;L DMSO溶解结晶，振摇10 min，测定每孔的OD值(测定波长570 nm，参比波长650 nm)。
（二）免疫荧光检测Blebbistatin对OGD/R模型下H9c2心肌细胞中线粒体形态及关键蛋白Drp1转位的作用情况激光共聚焦小皿接种适宜密度的细胞。
待细胞融合后，OGD6h/R6h造模。
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