硝呋太尔片含量分析方法学验证
摘要：目的 建立并验证测定硝呋太尔片含量的高效液相色谱法。方法 选择适用的色谱柱、流动相、流速、柱温、检测波长、进样量。结果 硝呋太尔的准确度、精密度等。 结论该方法简便易行、准确可靠，可作为硝呋太尔片的含量测定[3]。
关键词：硝呋太尔；含量测定；高效液相色谱法；方法学验证
正文：硝呋太尔的化学式为5-[(甲硫基)甲基]-3-[[(5-硝基-2-呋喃亚甲基]氨基]-2-恶唑烷酮,是一种能有效抑制妇科阴道滴虫、大肠杆菌、白色念珠菌的硝基呋喃类广谱抗生素[2]，临床多用于治疗由细菌、滴虫、念珠菌引起的外阴、阴道感染和白带增多及泌尿系统感染，消化道阿米巴病及贾第虫病，其对组织内阿米巴的作用比盐酸依米丁、克痢酰胺、甲硝唑等更好[10]。根据尚红艳，陈亚鹏的硝呋太尔合成工艺的优化的文章中了解到，硝呋太尔在一系列实验中需要做到避光处理[7]。
根据王亚洲，梁陈方的高效液相色谱法测定硝呋太尔片的含量、勒颖华的硝呋太尔阴道片的制备制备和质量控制、孙国祥，邓海莹，李闫飞的HPLC法测定硝呋太尔的4种中间体的含量和有关物质等文章的描述，可确定使用高效液相色谱法，高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂(固定相)的色谱柱进行分离测定的一种色谱方法。注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，根据固定相类型分为分配、吸附、或离子交换色谱等。根据固定相与流动相的极性大小，又可分为正相色谱法和反相色谱法[8]。反相色谱法适合于中等极性或非极性的弱酸、弱碱和中性化合物的分离分析，在实验初步阶段由于绝大部分药物均可用反相色谱法进行定量分析[5]，从而在该实验中选择了常用的反相色谱法进行定量分析。
在反相色谱系统中，根据硝呋太尔的分子量，化学结构式的极性等条件，选择最常用的色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶[9]，因为以硅胶为载体的一般化学键合固定相在pH大于8时，可使载体硅胶溶解；在pH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落，所以我们可以选择pH2-8的流动相。反相色谱常用流动相为甲醇-水(或缓冲盐)、乙腈-水(或缓冲盐)，参考勒颖华的硝呋太尔阴道片的制备和质量控制的文章，选择了碳酸溶液-乙腈作为流动相，从药典中可知当调节流动相中有机溶剂比例可调整被测物的保留时间，可用碳酸溶液-乙腈按不同的比例混合[9]，查看实验结果得到最佳的流动相比例。中国药典中的规定流动相中应尽可能不用缓冲盐，如需要，应尽可能使用低浓度的缓冲盐，如磷酸盐、醋酸盐或其他弱酸弱碱调节溶液pH[8]，在本实验中选用了10%磷酸溶液调节PH。由于在本实验中使用了十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，根据药典规定流动相中有机溶剂一般不低于5%，否则易导致柱效下降、色谱系统不稳定的结果[8]。温度会影响分离效果，从而在做实验时，应密切注意室温变化的影响，为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃[1]。
不同的检测器，不同厂家生产的检测器也会对实验结果有一定的影响，所以需根据药物的性质慎重选择检测器，检测器分为紫外-可见分光检测器，荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。由于硝呋太尔具有紫外可吸收性[4]，为了实验的方便性选择较为通用的紫外-可见分光检测器，根据药物的紫外可吸收波长可选用合适的波长。
通过邹丽，杨蕾，刘仲仪的硝呋太尔工作参照品的含量测定文章、ICH指导原则、中国药典，明确了方法学验证内容，如下：
色谱系统进行适应性试验，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可适当通过调整色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量等。该实验中需配制系统适用性溶液、杂质定位溶液、6份相同浓度对照溶液进行分析，系统适用性溶液各色谱峰分离度均应在1.5以上[8]，峰面积的相对标准差应不大于2.0%。主峰与杂质峰必须达到基线分离，主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。
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