开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
课题背景：
蛋白质印迹，它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种试验方法，在研究蛋白质定性、相对丰度、相对分子质量、蛋白质翻译后修饰等方面的一个有力工具，已经渗透到生命科学研究的各个领域，该技术的成熟对众多领域特别是医学诊断和食品安全检测领域意义重大。主要的实验程序包括蛋白质电泳(如SDS-PAGE等) 转膜、封闭、一抗、二抗孵育以及显色等[3]。主要机理有共价法和非共价法，其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
在蛋白质印迹中封闭的目的是为了减少抗体与膜的非特异性结合，将NC膜上无蛋白的部分空隙用脱脂奶粉中的非抗原蛋白填满，以免孵育抗体的时候一抗二抗与之结合，产生非特异条带或者是背景杂乱，干扰结果的分析。而不同浓度的脱脂奶粉中所含的非抗原蛋白的量也不同，如果含量太低在一定时间内就不足以填满所有的空隙，那么也就不能充分发挥封闭的作用，如果含量太高在相同的时间内虽然能够起到封闭的效果，但是这样不仅会造成资源的浪费，甚至有可能吸附在目的蛋白上，阻碍了目的蛋白与抗体的特异性结合。蛋白质印迹法成败的关键是首先必须将分离的蛋白从非变性或SDS-PAGE凝胶上转印至硝酸纤维素(NC)膜、聚偏乙烯氟化物(PVDF)膜等固相膜上,蛋白质印迹转膜有半干转和湿转两种，半干式蛋白质电泳印迹具有操作简单、快速、节约缓冲液、印迹条带背景清晰等特点，在本研究中采用半干转方法，分别采用凝胶电泳转膜和已知浓度的蛋白直接进行点膜，通过观察显影后蛋白的亮度和背景判断封闭效果。，
实验流程：
（1）SDS凝胶电泳
①制备凝胶电泳：
将已知的重、轻液和催化剂进行真空除气处理，后再冰浴温度降到0-4℃，挑选干净的12孔胶板和梳子，每槽放八片胶板，在槽中加入30-32℃的水然后用灌胶机自动灌浓度为4-20%的胶，待机器灌好后再轻轻插入梳子（注意插入梳子的方法，避免产生气泡），放至30-32℃的恒温恒湿箱中半小时后即可。
②蛋白样品处理：
将30KD(400ng/ul)蛋白稀释成200ng/ul、100ng/ul、50ng/ul、25ng/ul、12.5ng/ul,6.25ng/ul、3.125ng/ul、1.5625ng/ul，将4xloading buffer稀释成1x loading buffer，分别取6ul蛋白样品和4ul的1x loadingbuffer混匀放入水浴锅中95℃煮沸10min。
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
