一、拟解决的问题近年来,越来越多的研究发现了外泌体在组织损伤修复、免疫抗原呈递、神经退行性疾病和肿瘤迁移生长中发挥着非常重要的作用[1-4]。
可以看出,外泌体的研究对现代生物医药行业的发展具有重要意义。
目前大多的研究都是建立在离体外泌体上,所以外泌体的提取纯化效果是一切外泌体相关实验首要的步骤,也是一切后续研究真实可信的基础。
随着对外泌体的研究不断深入,外泌体分离的新方法不断涌现,但是目前仍不存在外泌体分离的金标准方法。
故本课题选取几种较常用的外泌体提取分离方法,通过文献查阅和实验比较几种方法的优缺点,以期为后续研究提供指导。
二、研究手段(1)超速离心法、膜亲合法、聚合物沉淀法分离外泌体1、超速离心法:4℃条件下依次以300g,2 000g,10 000g离心去除不需要的细胞、死亡细胞与细胞碎片等;再以100 000g超速离心分离、富集外泌体。
然后,用PBS清洗沉淀,去除部分残存蛋白质[5],最后用适量PBS重悬所得外泌体沉淀。
2、膜亲合法:将1体积缓冲液XBP加入1体积样品中,轻轻颠倒管子,搅拌均匀5次,让混合物升温至室温。
在exoEasy离心柱上混合物,在37℃以500g离心。
加入10ml缓冲液XWP并以5 000g离心以除去残留的缓冲液。
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