一、 课题背景TCR转基因小鼠模型是免疫学研究的重要工具。
在该小鼠体内,通过转基因TCR识别特定抗原的T细胞是T细胞总体的绝对多数。
这样的系统有助于阐明抗原特异型T细胞的效应机制。
然而,转基因表达存在着不稳定性。
为了排除阴性表达株,使用前需要对转基因小鼠进行阳性筛查。
OT-II是含有转基因TCR特异性识别Ovalbumin(OVA)323-339表位抗原的小鼠模型。
前期工作利用PCR基因法检测TCR的和链,显示所有转基因小鼠后代均为阳性。
但是,使用Tetramer染色法发现一定比例小鼠中的T细胞表现型却为阴性,提示这些小鼠的CD4 T细胞不能识别相应的OVA抗原,判定基因检测法不能作为OT-II小鼠的阳性筛选手段。
为此,本课题拟以OT-II小鼠模型为例,分别采用Valpha;、Vbeta;亚型抗体检测法、Tetramer检测法和特异性T细胞增殖反应检测法,在三个检测水平上进行分析论证,研究制定一种新的准确、有效、快速的OT-II转基因TCR阳性筛选方法。
二、 研究手段细胞处理:冷冻离心、红细胞裂解细胞表型检测方法:Valpha;、Vbeta;亚型抗体检测法、Tetramer检测法细胞功能检测方法:特异性T细胞增殖反应检测法细胞测定检测手段:流式细胞仪、细胞计数三、 日程安排2月28日-3月10日 检索并研读相关文献,了解检测方法的最新进展,比较各类方法的优缺点;3月10日-3月14日 进室学习,熟悉各类实验材料、方法、实验仪器;购置所需的实验器材、动物;写好实验方案,确定实验步骤;3月14日-3月31日 准备好材料,开展实验,建立Valpha;、Vbeta;亚型抗体检测法,确立检测方法的最佳条件,并做好实验记录;4月1日-4月15日 建立Tetramer检测法,确立检测方法的最佳条件,并做好实验记录;4月16日-4月30日 建立特异性T细胞增殖反应检测法,确立检测方法的最佳条件,并做好实验记录;5月1日-5月20日 分析实验结果,在三种检测方法之间建立起联系;完善实验设计,补充必要的实验;撰写毕业论文;5月21日-5月30日 修改论文。
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