开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、拟研究或解决的问题：
骨肉瘤由肿瘤性成骨细胞、骨样组织所组成，是临床上最常见的一种原发恶性骨肿瘤。
目前，用于骨肉瘤化疗的药物主要有氨甲喋呤、阿霉素、顺铂、异环磷酰胺等。临床上常将这些药物进行不同的组合，并大剂量使用，以充分发挥药物的协同作用。虽然针对骨肉瘤的化疗研究已取得了很大进展，但临床上仍有相当大比例的患者对现行化疗反应不敏感，导致预后很差。
骨肉瘤耐药类型较多，可分为内在耐药（intrinsic drug resistance，IDR）和获得性耐药（acquired drug resistance，ADR）两类。根据耐药谱的不同，又可分为原药耐药（primary drug resistance，PDR）和多药耐药（multidrug resistance，MDR）。肿瘤细胞克服某一药物所破坏的代谢途经，从而对该药产生耐药为原药耐药；肿瘤细胞对一种化疗药物产生耐药性的同时，对结构不同、作用方式不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药称为多药耐药。多药耐药是导致骨肉瘤化疗失败的一个重要原因。
随着对肿瘤耐药机制的研究逐渐深入，构建多种稳定的、高度耐药的模型是实验的前提，本课题拟采用大剂量冲击法和浓度梯度递增法相结合，逐步诱导构建人骨肉瘤细胞U-2 OS的阿霉素耐药模型；通过IC50、荧光显微镜、流式细胞术、Q-PCR和Western Blotting等技术对模型的耐药程度进行体外研究，并从分子水平探讨其耐药机理。
二、采用的研究手段：
1.MTT法
药物用DMSO配制成指定的母液浓度，用培养基稀释至所需浓度，倍比稀释；取对数生长期细胞，弃培养基，PBS洗2次，胰酶消化并用培养基制成含有2～3104个细胞/mL的细胞悬液；铺96孔板，5000个细胞/孔/200mu;L，96孔板的最外围用200mu;L的PBS填充，放置于37℃，5%CO2培养箱培养。铺板后24h给药，继续放置培养箱培养，给药后48h加入MTT 20mu;L/孔，继续培养4h后吸弃每孔液体，加入DMSO 150mu;L/孔，振摇15min，plus 384测量吸光度，测量波长为570nm，参比波长为630nm；实验数据为测量波长的吸光度与参比波长的吸光度之差值。使用下列公式计算药物对细胞的抑制率：
抑制率（%）=100（1-给药组OD值/对照组OD值）
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
