课题名称 重组人源ABCC4基因的构建与表达课题性质 radic; 基础研究应用课题 设计型 调研综述 理论研究ABCC4基因重组菌的构建和蛋白表达研究摘要：从293T细胞中提取出总RNA，经逆转录PCR扩增出ABCC4全长基因，采用酶切酶连的方式将其连接到pLVX-ires-Zgreen1载体上，完成工程菌的构建。
重组菌通过转染，在293T细胞中稳定表达，经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western blot验证ABCC4蛋白正常表达。
关键字：ABCC4基因，重组菌构建，蛋白表达Abstract: The total RNA was extracted from 293T cells, and the full-length gene of ABCC4 was amplified by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). The ABCC4 gene was ligated to pLVX-ires-Zgreen1 vector by enzyme digestion and ligation to complete the construction of engineering bacteria.The recombinant strain was transfected and stably expressed in 293T cells. The normal expression of ABCC4 protein was verified by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and Western blot.Keywords: ABCC4 gene, recombinant strain construction, protein expression1.ABC家族转运蛋白ABC转运蛋白（ATP-binding cassette transporters）是目前发现最大、最古老的跨膜转运蛋白家族之一，在真核生物和原核生物中均大量存在。
由于ABC转运蛋白结构中都有腺苷三磷酸（ATP）结合盒的存在，可以通过水解ATP产生的能量来转运底物，故又称为腺苷三磷酸结合盒转运蛋白[1]。
到目前为止，科研工作者在人类中已经鉴定出48种ABC转运蛋白亚型，并根据各亚型基因结构、氨基酸序列、结构域组成和系统发育分析将其分为7个亚家族（ABCA-ABCG）[2]。
ABC转运蛋白属于外排转运蛋白，他们利用ATP作为驱动能量将物质转运到细胞外，该类蛋白转运的物质有很多，包括金属离子、糖类、氨基酸、核苷酸和维生素等无机和有机分子，以及多肽、蛋白质、寡核苷酸、细胞代谢产物和药物等有机大分子化合物。
该类蛋白也与细菌营养和发病机制相关的保存机制、真菌孢子的形成、真核生物信号转导、蛋白分泌和抗原表达以及药物的耐药性密切相关[3-4]。
目前，已鉴定出至少11种与多药耐药（MDR）发展相关的ABC转运蛋白，包括P-糖蛋白（P-gP/ABCB1）、多药耐药相关蛋白（MRPs/ABCCs）和乳腺癌耐药蛋白（BCRP/ABCG2）[5-6]。
而且，每种蛋白都有特定的组织表达模式并发挥重要作用，在小肠、肝脏和肾脏中表达的ABC转运蛋白在药物处理和药物-药物之间的相互作用中显示出重要作用；在一些屏障中，如血脑屏障（BBB）、胎盘屏障和血眼屏障等都表现出相应ABC转运蛋白的高表达水平，用于保护敏感组织免受有毒化合物的侵害并保持细胞稳态。
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