开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)课题来源:自拟课题课题依据:千层纸素A是从黄芩系唇形科植物黄芩的干燥根中天然提取的黄酮类化合物,在临床中属于常用中药。
实验研究表明,千层纸素A除有一般黄酮类化合物的抗炎、抗病毒等生物活性之外,还具有较强的抗肿瘤作用,其很有可能成为治疗人类恶性肿瘤的一种有效药物。
慢性粒细胞白血病( Chronic Myelogenous Leukemia,CML) 是一种发生在造血干细胞的恶性骨髓增殖性疾病,白血病治疗过程中,白血病细胞对化疗药物产生耐药是导致化疗失败的主要原因,产生耐药的肿瘤细胞对结构和功能上截然不同的药物也表现出耐药性,即多药耐药(multidrug resistance, MDR)[1]。
成纤维细胞分泌的基质细胞衍生因子- 1 ( SDF- 1) 通过与其受体即肿瘤细胞表达的 CXCR4 结合,通过添补刺激血管发生的骨髓衍生细胞促进肿瘤生长,肌成纤维细胞和成纤维细胞是细胞外基质蛋白的主要来源,它们与药物摄取下降和肿瘤对一些治疗药物的敏感性调节有关[2]。
Iwamoto[3] 等假设白血病细胞和骨髓间充质细胞为白血病细胞提供对抗化疗药物治疗的保护性环境。
在本研究中,通过MTT实验来验证K562/ADR细胞株的耐药性以及千层纸素A是否能逆转其耐药。
通过DAPI染色和Western Blot蛋白分析等对给药后的肿瘤细胞凋亡变化和蛋白差异进行分析验证;运用免疫荧光实验来对相关蛋白表达进行研究,确定千层纸素A逆转K562/ADR耐药的作用机制。
主要解决的问题:1.千层纸素A对人慢性髓系白血病K562阿霉素耐药细胞株逆转耐药作用的药效学研究1.1体外细胞培养[4] 将K562/ADR细胞按适当浓度接种于培养瓶中,加入含100U/mL的青霉素、100U/mL的链霉素、10%胎牛血清的1640培养液,置于37℃恒温、5%CO2及饱和湿度的培养箱中培养,细胞呈半贴壁生长。
每2~3天传代一次,传代时吹打均匀、离心、重悬,根据所需细胞量移入新培养瓶中,适量添加完全培养液。
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