课题背景：
单纯疱疹病毒（herpessimplexvirus简称HSV）属于疱疹病毒科alpha;亚科。人是其唯一的自然宿主。是最早发现的人类疤疹病毒，也是所有人类病毒性疾病中最常见的病毒。无论是发展中国家还是发达国家，人群中HSV自然感染率都相当高，并且复发性高。HSV感染现已成为世界上第四大传染病。
HSV能感染人体多系统脏器，特别是新生儿和免疫减弱患者，感染常致严重后果。HSV为双股DNA病毒，可分为HSV一1和HSV一2两种血清型。HSV一1主要感染头面部和躯干上部皮肤，引起单纯疤疹病毒性脑炎(HSE)、疙疹性角膜炎、口腔疤疹、皮肤疤疹等，其中HSE是一种病死率很高的疾病。HSV一2主要感染外生殖器和躯干下部皮肤，引起生殖器疤疹、新生儿疤疹及胎儿崎形等。无疤疹特异症状的HSV宫颈炎是妇女的常见病，该病可能与宫颈癌的发生有关，可垂直感染胎儿或新生儿。病毒经口腔、呼吸道和生殖器粘膜以及破损皮肤侵入人体后可潜伏于感染者的周围神经节，使机体终生携带该病毒基因，并可周期性地被重新激活引起复发感染[l]。
目前,研究较多且经过临床评估的疫苗主要有亚单位疫苗、减毒活疫苗、复制缺陷病毒疫苗、裸DNA疫苗以及载体疫苗。本实验是探究亚单位疫苗的免疫注射剂量的初步探索方案。
亚单位疫苗激活T细胞，诱导体液免疫和细胞免疫。目前已有进入Ⅲ期临床的gD2-硫酸铝钾-3dMPL疫苗，该疫苗由GlaxoSmithKline公司生产，3-dMPL(3-O脱酰单磷酸脂质A)佐剂能够增强Th1应答，虽然可以明显减轻首次感染HSV-2的症状，但该结果仅限于HSV-1和HSV-2血清学反应均属阴性的女性中；Chiron公司生产的gB2-gD2-MF59疫苗，采用MF-59佐剂增强Th2应答，该疫苗由Ⅰ期临床实验证实该疫苗在体内能够产生不到6个月的暂时保护,然而在Ⅲ期临床评估中发现能够阻止HSV-2感染的有效率仅为9%，而对于首次感染HSV-2的耐受期以及复发率等也没有显著性差异[2,3]。运用截短的gD2做抗原的gD2t-AS04疫苗使用的佐剂也是3-dMPL,临床研究证实其能为HSV血清学反应呈阴性的女性提供73%~74%的保护,然而在男性和血清学反应呈阳性的女性中却无效[4,5]。很多学者认为通过佐剂增强的Th1免疫应答是gD2疫苗部分成功的所在,同样,在已感染HSV-1的女性中不起作用的结果也暗示了先前已建立的免疫干扰了疫苗起作用或者说gD2疫苗并不能增强先前因感染HSV-1而建立的免疫保护水平,倘若如此,鉴于80%~95%的成人曾经感染过HSV-1,因此,预防HSV感染的疫苗也就不可能产生显著的效出来应[5,7]。最近报道的AG-702疫苗改用人类组成性热休克蛋白(HSP)70作为佐剂,目前也已经进入Ⅰ期临床研究。此外,HSP70和HSV-2肽组合的疫苗也暗示了改变免疫佐剂、使用剂量、免疫程序等都将有可能增强机体对HSV的免疫应答[8]。
构建含人类单纯疱疼病毒膜糖蛋白(基因的重组真核表达质粒并转染哺乳动物细胞细胞系,为蛋白的纯化及鉴定奠定基础。方法:筛选蛋白胞外抗原富集区并化学合成,通过加入酶切位点和并导入真核表面细胞表达。
疫苗佐剂是能够提高机体对抗原的适应性免疫应答的物质[9]，能够在免疫反应低下的人群中诱导全面持久的免疫应答，因此疫苗佐剂在疫苗的研发中具有重要的作用。近几年有了新型佐剂研发的关注点：粘膜佐剂、复合佐剂、固有免疫系统佐剂等。合理选择和使用佐剂不但可以节约抗原的使用量，还可以迅速刺激免疫系统，增强免疫应答，并且可提高免疫人群的安全保障。在佐剂大量出现的同时，随之而来的是对其安全性的担忧。因此，抗原最佳免疫剂量、佐剂使用需要严谨对待，尽量避免或降低免疫毒性的发生。
实验流程：
由于本课题由五人完成，本人负责对照实验所以只加入PBS缓冲液不加入佐剂。
本课题采用Bradford试剂盒测定HSVgC2、gD1、gD2三种蛋白浓度。利用离心技术手段测定上清中是否有蛋白残留，以确定吸附完全。PBS分别与gC2、gD1、gD2三种高中低蛋白浓度混合后通过后肢肌肉注射免疫BALB/C小鼠，每次免疫前以及第三次免疫后通过眼眶取血，血液静置离心取血清，ELISA测定血清效价。
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