禽肺炎病毒M2抗原蛋白的克隆和表达纯化文献综述

 2023-09-11 11:09

文献综述

禽肺炎病毒(Avian Pneumovirus, Avian Metapneumovirus)是一种单链RNA病毒,以鸡和火鸡为天然宿主的烈性传染病病原体。该病毒传染性强,能够引起严重的呼吸道和肺部感染症状,给养殖业造成严重损失。禽肺炎病毒与人类偏肺病毒同源性很高,在分类学上属于副黏病毒肺病毒属。M2蛋白是禽肺炎病毒的重要基质糖蛋白,抗原性较强,因此是一个较理想的制备检测和结合禽肺炎病毒的抗体的抗原蛋白。但是M2是一个跨膜蛋白,其表达纯化难度较高。M2蛋白是禽流感病毒的跨膜蛋白,含有高度保守的抗原表位,是理想的交叉保护性疫苗的候选抗原。M2蛋白的细胞外部分M2e,由N段24个氨基酸残基组成,其前九个表位高度保守,但缺点是分子量小,免疫原性差。因此可以通过载体蛋白提高M2e的免疫原性。

利用补料分批培养技术大量发酵含有重组质粒的大肠杆菌,获得高效表达的M2蛋白,为后续M2抗原蛋白的表达纯化做好准备。为了获得禽肺炎病毒M2抗原蛋白,提取了禽肺炎病毒的DNA并获取目的序列,将人工合成并经过密码子优化的M2抗原蛋白基因克隆至大肠杆菌载体,构建重组表达载体,并转化至大肠杆菌BL21/DE3中实现表达。经包涵体分离、镍柱亲和层析和复性得到较纯的重组M2蛋白,并对其进行进一步的研究。
用基因工程的方法来表达蛋白质,必须经过纯化才能实现最终的目的。相对于核酸纯化来说,不同的蛋白质特性千差万别,纯化条件很难摸索,想找一种通用的纯化方法一直是一个难题。将目的蛋白和一个亲和纯化短标签进行融合表达,通过亲和纯化Tag蛋白来纯化目的蛋白,是我们常用的间接手段。综合来看,6xHis Tag是比较理想的,6个组氨酸个子小,pH=8时不带电,免疫原性差,利用优质的带镍离子的纯化填料进行亲和纯化,目标蛋白纯度高,方法简单方便,成本低,应用较为广泛。

大肠杆菌表达系统是目前应用最为广泛的重组蛋白表达系统。由于蛋白质表达速度过快,活性二硫键来不及正确配对等等原因,外源蛋白在大肠杆菌胞内往往以无活性的包涵体形式表达,而跨膜蛋白由于较强的疏水性,形成包涵体的可能性更大。由于包涵体复性折叠机制不明确,把无活性的包涵体复性为完全天然活性状态是一件很难的事情。较低的复性效率也仍然是大肠杆菌体系表达的许多外源蛋白造成损失或者难以有效制备的主要原因。本课题以禽肺炎病毒M2抗原蛋白为研究对象,进一步探究如何根据具体的目的和要求,优化纯化和复性的技术方法, 选择复性方法和纯化方法,合理设计纯化方案,进而得到高纯度的包涵体蛋白。

参考文献

[1]Ball C, Forrester A, Ganapathy K, et al. Co-circulation of genetically diverse population of vaccine related and unrelated respiratory mycoplasmas and viruses in UK poultry flocks with health or production problems[J]. Veterinary Microbiology, 2018: 132-138.

[2]Mas V, Nair H, Campbell H, et al. Antigenic and sequence variability of the human respiratory syncytial virus F glycoprotein compared to related viruses in a comprehensive dataset[J]. Vaccine, 2018, 36(45): 6660-6673.

[3]Mattia Cecchinato. 意大利禽肺炎病毒分离株的融和(F)蛋白和附着(G)蛋白基因序列分析[A]. 中国畜牧兽医学会.第15届世界禽病大会、中国畜牧兽医学会2007年学术年会论文集[C].中国畜牧兽医学会:中国畜牧兽医学会,2007:1

[4]Jankauskait L, Misevicien V, Vaidelien L, et al. Lower Airway Virology in Health and Disease—From Invaders to Symbionts[J]. Medicina-buenos Aires, 2018, 54(5).

[5]Tamura D, Inoue S, Kawahara Y,et al. Hypercytokinemia withhemophagocytic syndrome due to human metapneumovirus. Pediatr Int. 2018 Oct;60(10):974-976.

[6]谢志勤. 鸡新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒和禽肺炎病毒三重RT-PCR检测方法的建立[A]. 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会、解放军军事科学院军事医学研究院.中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会论文集[C].中国畜牧兽医学会动物传染病学分会、解放军军事科学院军事医学研究院:中国畜牧兽医学会,2017:2.

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